| 1. | Вымыть и осушить руки |
| 2. | Надеть перчатки |
| 3. Подготовка микроскопа к работе: | |
| 3.1. | Установить микроскоп на рабочем столе на расстоянии 3 – 5 см от края, размотать шнур, вставить вилку в розетку. |
| 3.2. | Установить объектив слабого увеличения (8х) на расстояние около 1 см (фокусное расстояние объектива малого увеличения) |
| 3.3. | Привести конденсор в рабочее положение, слегка открыть диафрагму. |
| 3.4. | Привести бинокулярную насадку в рабочее положение |
| 3.5. | Включить осветитель |
| 4. Работа на малом и среднем увеличении: | |
| 4.1. | Положить препарат на предметный столик покровным стеклом кверху |
| 4.2. | Движением макрометрического винта найти фокус слабого увеличения |
| 4.3. | Рассмотреть препарат, выбрать участок, который следует изучить при бỏльшем увеличении и поместить его в центр поля зрения |
| 4.4. | Не меняя фокуса (не поднимая тубуса), повернуть револьверное устройство и установить более сильный объектив (40х). |
| 4.5. | Поднять конденсор, открыть диафрагму |
| 4.6. | Сфокусировать объект при помощи микрометрического винта путем его вращения на полоборота вперед или назад |
| 5. Завершение работы | |
| 5.1. | Выключить свет, перевести револьвер на слабое увеличение, убрать препарат с предметного столика, закрыть диафрагму, опустить конденсор, опустить тубус, в бинокулярной насадке свести окуляры вместе |
| 5.2. | Вынуть шнур из розетки, аккуратно обмотать его вокруг основания микроскопа. Надеть чехол на микроскоп. |
| 5.3. |
3- приготовленные лаборантом препарат является некачественным, т.к. содержит глыбки темно-коричневого цвета. Этот артефакт (зерна пигмента) образовался в результате реакции кислого формалина с гемоглобином.
4- Для удаления пигмента срезы необходимо поместить:
· в 1-5% раствор аммиака (на 15–20 мин),
· 70% спирт (на 15–20 мин),
· 1% КОН в 80° спирте (10 мин).
Затем срезы необходимо промыть водой.
Окрасив депарафинизированный срез гематоксилином, медицинский лабораторный техник остался недоволен результатом: фон препарата был тёмным, структура ядер не просматривалась.
ЗАДАНИЕ 1
- Укажите, какой этап окраски препаратов был выполнен неудовлетворительно; подготовьте рабочее место для окраски препаратов
- Подготовьте препарат к окрашиванию
- Окрасьте препарат гематоксилином и эозином
- Расскажите о правилах архивирования гистологических препаратов
1.Темный фон препарата и нечеткая структура ядер могут появиться при плохой дифференцировке препарата солянокислым спиртом.
2-3 депарафинирование и окраска препаратов гематоксилином-эозином
| 1. | Вымыть и осушить руки |
| 2. | Надеть перчатки |
| 3.Подготовить рабочее место: | |
| 3.1. | Подготовить лоток, салфетки, песочные часы, парфиновые срезысрезы |
| 3.2. | Поместить на лоток штатив |
| 3.3. | Составить батарею для депарафинирования, расположив растворы в следующей последовательности: ксилол (1) – ксилол (2) – спирт 100 – спирт 96 (1) – спирт 96 (2) – спирт 70 дист.вода |
| 3.4. | Составить батарею для окрашивания, расположив растворы в следующей последовательности: дист.вода- гематоксилин- дист.вода- водопроводная вода- эозин- дист.вода |
| 4. депарафинирование | |
| 4.1. | Поместить срезы в раствор ксилола 1-2 на 3-5 мин в каждый |
| 4.2. | Провести срезы по батарее спиртов нисходящей концентрации |
| 4.3. | Сполоснуть срезы в дистиллированной воде |
| 5. окрашивание срезов гематоксилином-эозином | |
| 5.1. | депарафинированные срезы перенести в дистиллированную воду |
| 5.2. | окрасить гематоксилином 2-5 мин |
| 5.3. | промыть дистиллированной водой - 1 мин |
| 5.4. | промыть водопроводной водой - 3-5 мин |
| 5.5. | окрасить 1% раствором эозина – 0,5-1 мин |
| 5.6. | быстро промыть дистиллированной водой |
| 6. Завершение работы | |
| 6.1. | Разобрать батарею, бюксы с растворами составить на место, утилизировать использованные салфетки |
| 6.2. | Перчатки снять и поместить в дезраствор |
4. архивирование
После завершения вырезки кусочков из операционного материала, медицинский лабораторный техник поместил все инструменты, использованные перчатки и остатки материала в дезраствор.
ЗАДАНИЕ 1
- Дайте оценку действиям лаборанта и подготовьте рабочее место для взятия операционного материала
- Проведите маркировку и фиксацию материала
- Проведите дезинфекцию использованной посуды и инструментария
- Расскажите о правилах архивирования оставшегося после исследования материала (влажный архив)
1. Медицинский лабораторный техник поступил неверно. Оставшийся материал следует поместить в 10% нейтральный формалин (влажный архив).
2-3-взятие, маркировка и фиксация материала
| 1. | Вымыть и осушить руки |
| 2. | Надеть перчатки |
| 3.1. | расстелить клеенку (поставить лоток) |
| 3.2. | поставить на клеенку (лоток): емкость с широким горлом и притертой крышкой, заполненную 10% нейтральным формалином; гистологические кассеты, пинцет |
| 4. маркировка и фиксация материала | |
| 4.1. | открыть кассету (положить на лоток марлевую салфетку) |
| 4.2. | поместить в кассету (на салфетку) вырезанный врачом кусочек материала |
| 4.3. | Подготовить бумажную этикетку: простым карандашом написать порядковый номер, под которым материал зарегистрирован в журнале |
| 4.4. | Этикетку поместить в кассету (на салфетку с материалом) |
| 4.5. | Закрыть кассету, при этом должен раздаться щелчок (завязать салфетку). |
| 4.6. | Поместите кассету (салфетку) с материалом в емкость широким горлом, заполненную 10% нейтральным формалином. При этом объем фиксатора должен превышающем объем фиксируемого материала в 10-20 раз |
| 4.7. | Закрыть емкость крышкой и оставить под вытяжкой на время, необходимое для фиксации (1 сутки). |
| 5. Завершение работы | |
| 5.1. | использованные инструменты сложить в емкость для дезинфекции, экспозиция 1 час. |
| 5.2. | клеенку (лоток) протереть ветошью, смоченной в дез.растворе. |
| 5.3. | сбросить ветошь в емкость с дезраствором, экспозиция 1 час. |
| 5.4. | снять резиновые перчатки, погрузить их в емкость с дезраствором, экспозиция 1 час. |
4. влажный архив
Медицинский лабораторный техник получил задание залить в парафин операционный материал. С этой целью он использовал следующий алгоритм действий: спирт 70% - спирт 96% (1) – спирт 96% (2) - спирт 100% – ксилол (1) – ксилол (2) – смесь ксилола с парафином (при 37º С) – парафин (56º С).
2. Продемонстрируйте технику обезвоживания материала
3. Залейте материал в парафин
4. Расскажите о правилах архивирования парафиновых блоков
Медицинский лабораторный техник использовал правильный алгоритм действий
1-3 уплотнение материала и заливка его в парафин.
| 1. | Вымыть и осушить руки |
| 2. | Надеть перчатки |
| 3. Подготовить рабочее место: | |
| 3.1. | Подготовить батарею для обезвоживания и уплотнения материала |
| 3.2. | Подготовить инструменты. |
| 3.3. | Подготовить формочки для заливки. |
| 3.4. | Подготовить емкость с холодной водой для быстрого охлаждения парафина. |
| 4. обезвоживание | |
| 4.1. | Промытый материал поместить в 70% спирт. |
| 4.2. | Продемонстрировать, как материал переносят из одного реактива в другой, указать время выдержки в каждом реактиве. |
| 5. Заливка материала | |
| 5.1. | Достать из термостата емкости с парафином (2-я порция) и заливочный парафин. |
| 5.2. | Поместить емкости с парафином на водяную баню. |
| 5.3. | Теплым пинцетом перенести материал в центр бумажной формочки. |
| 5.4. | Заполнить формочку парафином для заливки. |
| 5.5. | Формочки до краев погрузить в холодную воду, пока на поверхности не появится пленка. |
| 5.6. | Полностью погрузить формочку в воду. |
| 6. Завершение работы | |
| 6.1. | Убрать емкости с парафином в термостат. |
| 6.2. | Утилизировать кассету (марлю). |
| 6.3. | Перчатки снять и поместить в дезраствор. |
4.архивирование
При изготовлении парафиновых срезов с блока кожи с волосом медицинский лабораторный техник испытывал затруднение: срезы покрывались полосами, разрывались.
1. Назовите возможные причины затруднения в резке данного блока.
2. Возможно ли исправление этого артефакта?
3. Техника нанесения адгезивной среды на предметные стекла. Что можно использовать в качестве адгезивного материала при наклеивании срезов на предметные стекла?
1. Причинами возникновения разрывов и полос на парафиновых средах могут быть:
· Дефект режущей поверхности
· Налипание парафина на режущий край лезвия
· Некачественный парафин
2. Для устранения артефакта следует:
· Немного сдвинуть лезвие и посмотреть, изменилось ли вместе с этим расположение царапин на срезе. Если царапины тоже сместились, то замените лезвие.
· Очистите лезвие с помощью щётки, смоченной в ксилоле. Во время чистки щётку следует вести вверх по направлению от режущего края, но ни в коем случае не ведите её вниз на режущий край.
· Дубль образца следует подвергнуть декальцификации или перезалить материал.
3. В качестве адгезивного материала при наклеивании срезов на предметное стекло можно использовать готовый желатиновый адгезив для срезов или приготовить самостоятельно адгезивную среду на основе сыворотки или яичного белка с глицерином.
Приступив к окрашиванию парафинового среза с кусочка щитовидной железы, медицинский лабораторный техник забыл провести депарафинизацию.
1. Может ли быть окрашен недепарафинизированный препарат? С какой целью проводиться депарафинизация?
2. Возможна ли коррекция подобной ошибки?
3. Виды наиболее часто используемых гистологических красителей.
1. Недепарафинизированный препарат не может быть окрашен. Депарафинизация используется для удаления парафина из среза. Депарафинизированный препарат можно высушить и сохранять. Растворитель парафина – ксилол следует менять после обработки 100-200 срезов.
2. Коррекция невозможна.
3. В гистологической практике применяют основные (щелочные), кислотные и нейтральные красители. Основные красители окрашивают структуры кислой природы. В первую очередь ядра клеток (ДНК, хроматин, ядрышковая РНК). Это окрашивание называют базофильным. Среди этих красителей самый распространённый ядерный краситель – гематоксилин. Структуры цитоплазмы с основными свойствами окрашиваются кислыми красителями. Самый распространённый кислый краситель – эозин. Среди нейтральных красителей наиболее употребим краситель – Судан (Судан III, IV), растворяющийся в жирах. Его используют при выявлении жировых включений в цитоплазме клеток.
Биологические объекты можно исследовать как живыми, так и фиксированными. В последнем случае для более тщательного изучения материал можно разделить на части и обработать различными красителями, чтобы выявить и идентифицировать те или иные структуры. Из исследуемого объекта можно приготовить временные или постоянные препараты.
Фиксация препаратов
Фиксация - это сохранение материала в состоянии, близком к естественному. Для этого необходимо быстро умертвить ткани, что лучше всего достигается с небольшими кусочками живого материала. Используемое для этого вещество называется фиксатором. Быстрой фиксацией достигается сохранение изначальной структуры объекта, причем ткани уплотняются настолько, что с них можно готовить тонкие срезы.
Обезвоживание препаратов
Обезвоживание проводится при подготовке материала к заливке или для заключения его в соответствующую среду, которая не смешивается с водой. Воду необходимо удалить также потому, что иначе препарат будет со временем разрушен бактериями. Для того чтобы сохранить ультраструктуру, обезвоживание надо проводить постепенно, обрабатывая материал рядом водных растворов этанола или про-панона (ацетона) со все возрастающей концентрацией, и закончить обработку «абсолютным» (безводным) этанолом или пропаноном.
Просветление препаратов
Некоторые из общеупотребительных сред для заливки и заключения не смешиваются со спиртом . Поэтому его надо постепенно замещать средой (просветляющим веществом), с которой заливочная среда смешивается, например ксилолом. Это приводит также к тому, что материал становится прозрачным.
Заливка препаратов
Для того чтобы с помощью микротома получить очень тонкий срез, необходимо, чтобы материал был залит в соответствующую опорную среду . При приготовлении препаратов для световой микроскопии объекты заливают в парафин, которому затем дают остыть. Для электронной микроскопии приходится использовать более твердые вещества (пластмассы или смолы), поскольку здесь необходимы особо тонкие срезы, а значит, и опора должна быть более плотной.
Различия в подготовке материалов для светового и электронного микроскоповИзготовление срезов препаратов
Как правило, толщина кусочков материала слишком велика, чтобы сквозь них могло пройти достаточное для исследования под микроскопом количество света. Обычно приходится срезать очень тонкий слой исследуемого материала, т. е. готовить срезы. Срезы можно делать бритвой или на микротоме. Вручную срезы готовятся с помощью остро отточенной бритвы. Для работы на обычном микроскопе срезы должны быть толщиной 8-12 мкм. Ткань закрепляют между двумя кусочками сердцевины бузины. Бритву смачивают жидкостью, в которой хранилась ткань; срез делают через бузину и ткань, причем бритву держат горизонтально и двигают ее к себе медленным скользящим движением, направленным чуть вкось. Быстро сделав несколько срезов, следует выбрать из них самый тонкий, содержащий характерные участки ткани.
Срез с ткани, залитой в ту или иную среду, можно сделать на микротоме. Для светового микроскопа срезы толщиной в несколько микрометров можно сделать с залитой в парафин ткани с помощью специального стального ножа. На ультратоме изготавливают чрезвычайно тонкие срезы (20-100 нм) для электронного микроскопа. В этом случае необходим алмазный или стеклянный нож.
Срезы для светового микроскопа можно приготовить, не заливая материал в среду; для этого используют замораживающий микротом. В процессе приготовления замороженного среза образец сохраняется в замороженном и, следовательно, в твердом состоянии.
Окрашивание препаратов
Как правило, биологические структуры на препаратах прозрачны , поэтому для получения контраста между ними приходится прибегать к различным средствам. Самым распространенным является окрашивание. Некоторые красители, используемые в световой микроскопии, перечислены в таблице.
Определенные красители в низких концентрациях не токсичны для живых тканей и поэтому могут применяться для окрашивания живого материала. Их называют прижизненными (витальными) красителями. К ним относятся, например, метиленовый синий и нейтральный красный.
При окрашивании парафиновых срезов парафин удаляют с помощью растворителя, а срез перед окрашиванием частично обводняют.
Полностью окрашенные срезы заключают на предметном стекле в специальную среду, например в канадский бальзам или эупарол; она не пропускает воздух, так что срез может сохраняться в ней неограниченно долго. Заключенный в среду срез накрывают покровным стеклом.
Последовательность описанных выше действий типична, когда речь идет о приготовлении тонких срезов для постоянных препаратов. Однако часто в порядок действий вносят два следующих изменения:
а) если срез сырого материала готовят вручную, то сначала делают срез, а потом его фиксируют;
б) окрашивать можно после фиксации или же в процессе обезвоживания на какой-либо его стадии. Например, красителем, растворенным в 50%-ном этаноле, можно окрасить срез после его обезвоживания в 50%-ном этаноле.
| Признаки | Прокариоты | Эукариоты |
| 1. Морфологически оформленное и отделенное от цитоплазмы ядерной оболочкой ядро. | ||
| 2. Число хромосом | ||
| 3. Хромосомы кольцевые | ||
| 4. Хромосомы линейные | ||
| 5. Константа седиментации рибосом | ||
| 6. Локализация рибосом: - рассеяны в цитоплазме - прикреплены к эндоплазматическуму ретикулуму | ||
| 7. Аппарат Гольджи | ||
| 8. Лизосомы | ||
| 9. Вакуоли, окруженные мембраной | ||
| 10. Газовые вакуоли, не окруженные мембраной | ||
| 11. Пероксисомы | ||
| 12. Митохондрии | ||
| 13. Пластиды (у фототрофов) | ||
| 14. Мезосомы | ||
| 15. Система микротрубочек | ||
| 16. Жгутики (если присутствуют): - диаметр - в поперечнике имеют характерное расположение микротрубочек «9+2» | ||
| 17. В составе мембран присутствуют: - разветвленные и циклопропановые жирные кислоты - полиненасыщенные жирные кислоты и стеролы | ||
| 18. В составе клеточных стенок присутствуют: - пептидогликан (муреин, псевдомуреин) - тейхоевые кислоты - липополисахариды - полисахариды (целлюлоза, хитин) | ||
| 19. Размножение клеток происходит путем: -простого деления - митоза | ||
| 20. Характерно разделение протопласта внутренними мембранами на функционально различные отсеки | ||
| 21. Цитоскелет трехмерный, включает микротрубочки, промежуточные и актиновые филаменты | ||
| 22. Связь между компартментами осуществляется за счет циклоза, эндо и экзоцитоза | ||
| 23. Наличие эндоспор |
5.4. Итоговый контроль знаний:
- Вопросы по теме занятия:
1. Объяснить сущность науки «Биология» и ее значение в медицине.
2. Обосновать, почему Человека как объекта медицины мы изучаем, прежде всего, как представителя животного мира.
3. Система классификации живых организмов.
4. Представление о неклеточных и клеточных формах жизни.
5. Понятия о про- и эукариотах.
6. Разнообразие клеточных форм жизни.
7. Представление об увеличительных приборах, истории их открытия и совершенствования.
8. Значение увеличительных приборов в развитии биологии и медицины.
- Тестовые задания:
1. Предметный столик относится к части микроскопа
1) механической
2) оптической
3) осветительной
4) препаровальной
2. Компоненты осветительной части микроскопа располагаются
1) в гнездах револьвера
2) в верхней части тубуса
3) у основания лапки штатива
4) на предметном столике
3. Назначение макрометрического винта
1) перемещение держателя с окуляром в вертикальном направлении
2) перемещение держателя с окуляром в горизонтальном направлении
3) перемещение столика с объектом в вертикальном направлении
4) перемещение столика с объектом в горизонтальном направлении
4.Кратность увеличения окуляра микроскопа «Биолам» может быть
5. Кратность увеличения иммерсионного объектива
- Решение ситуационных задач:
Задача №1
Постоянный препарат изучен на малом увеличении, однако при переводе на большое увеличение объект не виден, даже при коррекции макро- и микрометрическим винтами и достаточном освещении. Необходимо определить, с чем это может быть связано?
Задача №2
Препарат помещен на предметный столик микроскопа, имеющего в основании лапки штатива зеркало. В аудитории слабый искусственный свет. Объект хорошо виден на малом увеличении, однако при попытке его рассмотреть при увеличении объектива х40, в поле зрения объект не просматривается, видно темное пятно. Необходимо определить, с чем это может быть связано?
6. Домашнее задание для уяснения темы занятия (согласно методическим указаниям для внеаудиторной работы по теме занятия)
1. Изготовление микропрепаратов представителей прокариотических (бактериальные клетки) и эукариотических организмов (нервные клетки, клетки кожицы лука).
- Обязательная
1. Биология в 2 кн. Учебник для медиц. спец. вузов / под ред. В.Н Ярыгина. М.: Высш. шк., 2005.
2. Руководство к практическим занятиям по биологии: учебное пособие / под ред. В.В. Маркина. М.: Медицина, 2006.
- Дополнительная
1. Общая и медицинская генетика: учебное пособие / ред. В.П. Щипков. М.: Академия, 2003.
2. Гинтер Е.К. Медицинская генетика: учебник. М.: Медицина, 2003.
3. Бочков Н.П. Клиническая генетика: учебник. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2004.
4. Северцов А.С. теория эволюции. М.: Владос, 2005.
5. Жимулев И.Ф. Общая и молекулярная генетика: учебное пособие. Новосибирск: Сибуниверизд., 2007.
7. Григорьев А.И. Экология человека: учебник. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008.
8. Чернова Н.М. Общая экология: учебник. М.: Дрофа, 2004.
- Электронные ресурсы
1. Электронная библиотека по дисциплине Биология. М.: Русский врач, 2003.
2. ИБС КрасГМУ
4. БД Медицина
5. БД Гении медицины
1. Установка микроскопа на рабочем месте является важным условием успешной работы. Микроскоп следует поставить, ориентируя его для наблюдения левым глазом, на расстоянии около 3 см от края стола.
2. Перед работой необходимо протереть все внешние части микроскопа, не вынимая окуляр.
3. Для обеспечения максимального движения предметного столика (и препарата) перед началом работы с микроскопом следует центрировать предметный столик, т.е. движением винтов привести его в положение,
при котором линза конденсора располагается точно посередине отверстия предметного столика. Центрировать предметный столик нужно и в процессе работы, и после ее окончания.
4. Освещение поля зрения проводится следующим образом. При изучении зоологических подвижных объектов лучше использовать вогнутое зеркало, предварительно подняв конденсор вверх до упора. Наилучшее освещение дает рассеянный дневной свет, но можно использовать и другие источники света. Следует помнить, что нежелательно слишком яркое и с бликами освещение поля зрения, беспокоящее живые объекты и опасное для зрения исследователя. Поле зрения должно быть освещено равномерно. При обнаружении в нем темных зон следует проверить положение револьвера и частей конденсора. При изучении прозрачных или бесцветных объектов поле зрения следует притенить, прикрыв диафрагму или опустив конденсор. При рассмотрении темных, интенсивно окрашенных объектов, диафрагму нужно открыть.
5. Фокусировка изображения. Используя постоянный или изготовив временный препарат, помещают его на предметный столик.
Начинать работу нужно с изучения объекта при малом увеличении, поэтому, приступая к работе и закончив ее, следует поставить микроскоп на малое увеличение. Понять необходимость выполнения этого требования можно, если наблюдать изменения расстояния между нижним концом объектива и препаратом при повороте револьвера и смене объектива малого увеличения (10 х или 15 х) на большое (40 х). Исходное положение объектива малого увеличения ~1 см от нижнего его края до препарата.
Исследуя объект, основную информацию о нем можно получить при малом его увеличении, при котором оптимальны освещенность и резкость. Переходя на большое увеличение, мы выигрываем в размерах объекта, но значительно проигрываем в четкости общей картины.
При малом увеличении фокусировка (наведение на резкость) осуществляется с помощью макровинта под постоянным контролем глаза, т.е. не отнимая глаза от окуляра. Добившись необходимой резкости (грубая наводка макровинтом), окончательную доводку фокусировки выполняют микровинтом. При хорошей грубой наводке движение микровинта в одну или другую сторону (от себя или к себе) не должно превышать двух полных оборотов. В противном случае следует снова использовать макровинт. Это особенно важно при работе с большим увеличением, когда расстояние от края объектива до препарата очень
18 Технические средства изучения микроскопических объектов
Микроскоп бинокулярный стереоскопический (МБС) 19
мало. При большом увеличении следует пользоваться только микровинтом, предварительно проведя грубую наводку при малом увеличении, а затем поворотом револьвера установив большое увеличение. Закончив изучение препарата при большом увеличении, микроскоп следует сразу перевести на малое увеличение.
При работе с объективами разного увеличения нужно помнить два важных обстоятельства.
Во-первых, микроскоп дает плоскостное изображение объекта. Поэтому при большом увеличении мы видим четко очень тонкую плоскость, все, что выше или ниже ее, видно неясно, и нужно постоянно работать микровинтом, чтобы рассмотреть все структуры. При объективе малого увеличения исследуемая плоскость толще и часто позволяет отчетливо видеть весь объект.
Вторая особенность работы при разных увеличениях связана с освещением. Маленькое входное отверстие и свойства линз объектива большого увеличения пропускают очень узкий пучок световых лучей, поэтому при переходе с малого на большое увеличение мы значительно теряем в интенсивности освещения объекта. Необходимо открыть диафрагму конденсора.
6. Перемещение препарата на предметном столике при малом увеличении осуществляется вручную. Определенную трудность представляет то, что оптическая система микроскопа дает обратное изображение. Нужна определенная сноровка, чтобы усвоить: все, что мы видим сверху, на самом деле расположено внизу, то, что справа, - находится слева, и наоборот.
При переходе на большое увеличение движение препарата должно быть очень точным и проводится винтами предметного столика. Переходя с малого на большое увеличение, объект или его часть, которую нужно изучить, необходимо предварительно движением препарата разместить в центре поля зрения малого увеличения и лишь после этого перевести на большое увеличение.
Микроскоп, как всякий точный прибор, требует бережного обращения. Протирать его, особенно линзы окуляра и объектива, изготовленные из мягкого, легко повреждаемого стекла, нужно осторожно, используя мягкие, много раз стиранные сухие полотняные салфетки. Нельзя использовать для очистки стекол спирт, т.к. это вызывает растворение специальных покрытий и помутнение оптики.
Нельзя самостоятельно развинчивать окуляры и объективы. Их повреждения может устранить только специалист.
Микроскоп бинокулярный стереоскопический (МБС)
Для изучения объемных организмов и наблюдения за движением, питанием и другими формами поведения достаточно крупных (не микроскопических) животных, а также для их препарирования используются бинокулярные стереоскопические микроскопы малого увеличения (МБС). Они дают прямое изображение, имеют большое поле зрения, широкий диапазон разрешающих увеличений (табл. 2). С помощью МБС можно изучать прозрачные водные объекты в проходящем световом потоке и непрозрачные, темные - в отраженном свете. В настоящее время используются модели МБС-9 и МБС-10 (рис. 3).
Таблица 2 Кратность увеличения объектов бинокулярным микроскопом при использовании разных объективов и окуляров
| Окуляры | ||||||
| Объективы | 6" | 8" | 12,5 х | 14" | ||
| 0,6" | 3,5 | 4,5 | 8,1 | |||
| I х | 12,5 | 14,3 | ||||
| 2" | 28,6 | |||||
| 4 х | 57,2 | |||||
| 7 х |
Оптический блок МБС включает оптическую головку и окулярную насадку.
В оптическую головку вмонтированы все оптические детали, включающие объектив микроскопа, выше которого установлен барабан с галилеевскими системами. Ось барабана заканчивается расположенными снаружи с двух сторон рукоятками, при вращении которых происходит переключение увеличений, значения которых нанесены на рукоятках (7 х, 4 х, 2 х, I х, 0,6 х).
Чтобы установить нужное увеличение, необходимо, вращая барабан, цифру на рукоятке совместить с точкой на подшипнике. При этом перефокусировку проводить не нужно. Положение барабана фиксируется щелчком. Фокусировка объектива оптической головки производится винтами на направляющей, с помощью которых поднимают или опускают головку относительно столика микроскопа.
20 Технические средства изучения микроскопических объектов
Окулярная насадка состоит из двух призм, заключенных в подвижные оправы, на которых укреплены окулярные трубки. Двигая оп-швы призм, можно менять расстояние между центрами линз окулярных tdv6ok адаптируя их положение к межзрачковому расстоянию глаз исследователя.
Предметный столик съемный, устанавливается и закрепляется винтом на специальном основании. На задней стенке основания столика имеется гнездо для осветителя. Внутри основания расположено зеркало с матовой и зеркальной поверхностями и рукояткой для его вращения при регулировании освещения поля зрения.
Осветительная система, помимо зеркала, включает специальный осветитель, состоящий из конденсора и лампы накаливания, объединенных общим корпусом.
Изучение объекта возможно в отраженном и проходящем свете. Чтобы использовать осветитель для работы в отраженном свете, его крепят на шарнирном кронштейне. Для наблюдения в проходящем свете осветитель переносится в гнездо основания предметного столика.
В зависимости от структурных особенностей объекта (его плотности, прозрачности, окраски) отверстие предметного столика может закрываться стеклянной или металлической пластинкой, одна сторона которой окрашена в белый, другая - в черный цвет.
Изготовление препаратов для микроскопирования
Для изучения под микроскопом используют заранее изготовленные постоянные препараты (их изготовление требует определенных навыков и времени) либо по ходу работы готовятся временные препараты. Материалом для них могут служить целые микроскопические или достаточно мелкие объекты (тотальные препараты) или части их тела.
При работе с микроскопом любой объект помещается на предметное стекло - стеклянную пластинку стандартного размера (76 х 26 мм). Очень немногие объекты рассматриваются сухими, чаще в капле воды или другой жидкости. Чтобы предохранить стекла объективов от увлажнения, помещенный на предметное стекло в капле жидкости материал покрывается покровным стеклом. Его обычный размер 18 х 18 мм. Оно изготавливается из высококачественного стекла, очень тонкое и хрупкое.
Технические средства изучения микроскопических объектов
Покрывать каплю жидкости с исследуемым материалом нужно так, чтобы на препарате не оставались пузырьки воздуха. Для этого, держа покровное стекло за два уголка, противоположную его грань ставят в каплю жидкости и постепенно опускают стекло (рис. 4). Оставшиеся пузырьки легко отличить: они имеют широкий темный ободок, а поверхность их отливает зеркальным блеском. Крупные пузырьки также имеют темное окаймление, а внутренняя их поверхность напоминает запотевшее стекло.
Покрывая подготовленный временный препарат покровным стеклом, необходимо учитывать объем изучаемого объекта, в противном случае он может быть деформирован или раздавлен тяжестью стекла. Во избежание этого на покровное стекло наносят восковые ножки. Обычный чистый пчелиный воск смешивается со скипидаром при подогреве (и тщательном соблюдении правил противопожарной безопасности!) в пропорции 2,5:1. Такая масса может длительное время храниться, лучше в стеклянном бюксе или коробке. Перед использованием воск слегка разминают пальцами, чтобы он стал пластичнее. Затем все четыре уголка покровного стекла, слегка царапая ими по комочку, снабжают восковыми ножками желаемой высоты и покрывают объект на препарате, ориентируя покровное стекло ножками вниз.
Подцарство Protozoa - простейшие Тип Sarcomastigophora - саркомастигофоры
Тип объединяет более 25 000 видов простейших. Знакомству с его представителями в лабораторном практикуме по зоологии беспозвоночных уделяется значительное внимание. В частности, предусматривается ознакомление студентов с простейшими, принадлежащими к трем наиболее значимым подтипам: саркодовых, жгутиконосцев и опалинат.
Подтип Sarcodina - саркодовые
Изучение животных традиционно начинается с одноклеточных, а среди последних - с саркодовых. Наиболее удобным объектом является группа пресноводных амеб. Они малоподвижны, имеют достаточно простое строение и легко культивируются в лабораторных условиях. Все это облегчает их изучение.
Представители подтипа в большинстве своем характеризуются амебоидным движением. Обитают в водной среде, почве, имеются паразитические формы.
Надкласс Rhizopoda - корненожки
Объединяет организмы с псевдоподиями, не имеющими высоко-дифференцированных внутренних скелетных образований.
Класс Lobosea
Амебоидные формы с лопастевидными псевдоподиями (лобопо-диями), для которых не характерно слияние в сетевидные структуры.